Anticorpi anti-ADN dublu catenar

Laborator Synevo

Informatii generale

Lupusul eritematos sistemic (LES) este o boala inflamatorie cronica autoimuna care apare predominant la femei de varsta reproductiva. Anticorpii anti-ADN  dublu catenar (anti-ADNdc) reprezinta marca acestei afectiuni.

Detectia  anticorpilor  indreptati impotriva ADN  este  importanta atat  in diagnosticul  lupusului eritematos sistemic cat si in evaluarea activitatii bolii, in special la pacientii cu nefrita lupica.

Anticorpii anti-ADN sunt impartiti in 2 tipuri: anticorpi anti-ADNdc (nativ) si anticorpi anti-ADN monocatenar (denaturat). Anticorpii anti ADNdc (nativ) recunosc in principal epitopii stratului extern ai scheletului dezoxiriboza-fosfat din  dublul helix format de cele 2 catene polinucleotidice ale ADN-ului. Anticorpii anti-ADN monocatenar recunosc epitopii  stratului intern  reprezentat de bazele azotate purinice si pirimidinice.

Prevalenta anticorpilor  anti-ADNdc  la  pacientii cu LES este de 60-90%,  in functie de metoda de detectie utilizata si de gradul de activitate al bolii. Anticorpii anti-ADNdc pot fi detectati ocazional si la pacienti cu alte boli autoimune, in infectii (Epstein-Barr, hepatita B), dupa administrarea anumitor medicamente (hidralazina, interferon, inhibitori de TNF) si in rare cazuri, la oamenii sanatosi, 85% din acestia putand dezvolta LES  in 5 ani de la detectia initiala a anticorpilor anti-ADN^{3, 4, 5, 6}.

Anticorpii anti-nucleozomi sunt de asemenea un marker exclusiv de lupus eritematos sistemic. Studii clinice  au demonstrat  ca  anticorpii anti-ADNdc sunt intotdeauna asociati cu anticorpi anti-nucleozomi, iar anticorpii anti-nucleozomi apar inaintea anticorpilor anti-ADNdc.

Pentru detectia anticorpilor anti-ADNdc sunt utilizate in mod curent 3 tipuri de metode: metoda imunoenzimatica, metoda RIA (testul Farr) si metoda imunofluorescentei indirecte utilizind ca substrat Crithidia luciliae (CLIFT), metoda RIA fiind  considerata gold-standard.

Test anti-ADNdc – nucleozomi ELISA utilizat in laboratorul nostru  demonstreaza  o sensibilitate mai mare, pastrind aceeasi specificitate, in comparatie cu tehnica gold-standard – testul Farr. Astfel, intr-un studiu de cohorta efectuat la Spitalul universitar Charite din Berlin, serurile a 964 pacienti (207 pacienti cu SLE, 357 pacienti cu alte boli reumatismale – 162 pacienti cu artrita reumatoida, 88 pacienti cu sindrom Sjoegren, 81 pacienti cu scleroza sistemica, 26 pacienti cu miozita – si 400 donatori sanatosi) au fost analizate utilizand pentru detectia anticorpilor anti-ADNdc 5 metode diferite: metoda RIA, anti-ADNdc ELISA, anti-nucleozomi ELISA, CLIFT (Crithidia luciliae immunofluorescence test) si anti-ADNdc-nucleozomi ELISA ^{3, 4, 5, 6}.

Comparandu-se  semnificatia clinica a acestei metode cu tehnicile deja utilizate, inclusiv cu  metoda RIA considerata gold-standard, testul anti-ADNdc-nucleozomi ELISA a aratat o sensibilitate superioara (60.9%) fata de metoda gold-standard (52%), cu o specificitate de 98.9% in toate serurile analizate la un cut-off de 100 UI/ml. Acest lucru se datoreaza tehnicii inovative de cuplare a antigenului la microplaca. Studii efectuate recent au aratat faptul ca, la pacientii cu boli autoimune, nucleozomii, ce contin ADNdc (si nu ADN-ul izolat) reprezinta principalul stimul imunogen in vivo.  Din acest  motiv substratul antigenic folosit, in vitro, in testul nostru este reprezentat  de ADNdc cuplat la faza solida cu fractiuni de nucleozomi  inalt purificati,  in contrast cu tehnicile conventionale de detectie a anticorpilor anti-ADNdc care utilizeaza ca substanta de cuplare a antigenului la microplaca de reactie protamina sau poli-L-lizina, ce pot  da reactii nespecifice. Configurarea speciala a antigenului in testul anti-ADNdc – nucleozomi ELISA asigura o prezentare autentica a epitopilor  majori relevanti si minimalizeaza rezultatele fals-pozitive. In plus, testul are avantajul ca nu implica o metoda radioactiva ^{3, 4, 5, 6}. 

O concentratie crescuta de anticorpi anti-ADN dublu catenar-nucleozomi ELISA  este semnificativa pentru diagnosticul de LES. S-a demonstrat ca testul  anti-ADNdc-nucleozomi ELISA poate detecta peste 18% mai multe cazuri de LES decat testele conventionale.

Intr-o analiza longitudinala pe 20 pacienti , care au fost monitorizati timp de 69 vizite, s-a demonstrat corelarea titrului anticorpilor anti-ADNdc –nucleozomi ELISA cu gradul de activitate al bolii, respectiv cu scorul SLEDAI modificat ⁶.

Recomandari pentru determinarea ADNdc – suspiciune LES; monitorizarea pacientilor cu boala lupica^1;2. 

Pregatire pacient – à jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese)¹ 

Specimen recoltat – sange venos¹ 

Recipient de recoltare – vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator¹.

Prelucrare necesara dupa recoltare – se separa serul prin centrifugare¹.

Volum proba – minim 0.5 mL ser¹.

Cauze de respingere a probei – ser intens hemolizat, lipemic sau puternic contaminat bacterian¹.

Stabilitate proba -serul separat este stabil 7 zile la 4°C; timp mai indelungat la -20°C¹.

Metoda – ELISA¹.

Antigenul este reprezentat de ADNdc complexat cu nucleozomi si cuplat la faza solida.

Valori de referinta:

<100 UI/mL : negativ

>=100 UI/mL : pozitiv ¹

Limite si interferente :

Un rezultat negativ nu exclude boala lupica.

Anticorpii anti-ADN dublu catenar mai pot aparea, intr-un procent scazut si in alte boli reumatismale (<1% din cazurile de poliartrita reumatoida si <10% din cazurile de sindrom Sjögren primar si boala mixta de tesut conjunctiv) , hepatita cronica activa, ciroza biliara, mononucleoza infectioasa.

Procainamida si hidralazina pot induce atat anticorpi anti-histone (specifici pentru lupusul indus medicamentos) cat si anticorpi anti-ADN^2;3. 

Bibliografie

1. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2013. Ref Type: Catalog
2. Laboratory Corporation of America. Directory of Services and Interpretive Guide. Anti-dsDNA (Double-Stranded) Antibodies. www.labcorp.com 2013. Ref Type: Internet Communication
3. Makowski GS, Ramsby ML. Selective detection of autoimmune antibodies to single- and double-stranded DNA by enzyme immunoassay. Ann Clin Lab Sci. 2003 Spring;33(2):142-8.4. Rouquette AM, Desgruelles C.  Detection of antibodies to dsDNA: an overview of laboratory assays. Lupus. 2006;15(7):403-7.
4. Radice A, Sinico RA. A new oligonucleotide-based ELISA for the detection of anti-double-stranded DNA antibodies. Autoimmunity. 2006 Mar;39(2):113-9.
5. Robert Biesen, Cornelia Dähnrich, Anke Rosemann, Fidan Barkhudarova, Thomas Rose, Olga Jakob, Anne Bruns, Marina Backhaus, Winfried Stöcker, Gerd-Rüdiger Burmester, Wolfgang Schlumberger, Karl Egerer and Falk Hiepe Anti-dsDNA-NcX ELISA: dsDNA-loaded nucleosomes improve diagnosis and monitoring of disease activity in systemic lupus erythematosus, Arthritis Research & Therapy 2011, 13:R26