QuantiFERON TBC test

Laborator Synevo

 

Informatii generale

Tuberculoza (TBC) reprezinta o boala infectioasa respiratorie contagioasa produsa de bacteriile incluse in complexul Mycobaterium tuberculosis (M. tuberculosis, M. bovis si M. africanum).

Infectia tuberculoasa cuprinde atat forme active cat si latente; tuberculoza latenta se produce atunci cand o persoana devine expusa la M. tuberculosis, iar organismul controleaza infectia dar nu reuseste sa o eradicheze. Se estimeaza ca aproximativ 10% din persoanele cu tuberculoza latenta vor progresa in cursul vietii catre o forma activa. Printre cauzele associate cu reactivarea infectiei latente se numara infectia HIV si tratamentele cu antagonisti de TNFα. Din acest motiv, diagnosticarea tuberculozei latente reprezinta o etapa importanta in prevenirea reactivarii infectiei in special la persoanele cu risc crescut. Tratamentul tuberculozei latente poate reduce semnificativ riscul de progresie catre formele active⁵.

QuantiFERON TB, dezvoltat de firma Cellestis Limited (Australia),  a fost aprobat de FDA in mai 2005 ca test in vitro cu utilitate in diagnosticul infectiei cu Mycobacterium tuberculosis, atat pentru forma latenta cat si pentru cea activa. In Comunitatatea Europeana testul a fost certificat pentru a fi folosit in aceleasi situatii in care este indicat testul la tuberculina.

Pana nu demult, IDR la tuberculina a reprezentat singura metoda de diagnostic a infectiei TBC. Desi larg folosit testul la tuberculina prezinta o serie de limitari. In cazul QuantiFERON-ului, care este un test de laborator efectuat din singe, stimularea limfocitelor cu antigenele TBC are loc in tubul de flebotomie si nu intradermic. Din acest motiv se exclude efectul de “booster” care poate sa apara in cazul testului la tuberculina (efectuarea unui test cutanat la o persoana care nu a fost expusa la infectia TBC stimuleaza sistemul imun si-l determina sa reactioneze la tuberculina intr-o etapa ulterioara, cand se repeta testul cutanat).

Spre deosebire de IDR la tuberculina, rezultatele testului nu sunt influentate de vaccinarea BCG; infectiile in antecedente cu mycobacterii netuberculoase exercita de asemenea o influenta mai redusa. Sunt eliminate si reactiile adverse de hipersensibilitate care pot sa apara in cazul testului cutanat. De asemenea rezultatele la QuantiFERON TBC test sunt mult mai obiective, fara sa intervina erori in citire si interpretare^1;4;5.

Indicatiile testului:

1. Poate fi folosit in toate situatiile in care este utilizat in mod obisnuit testul la tuberculina:

-suspiciune clinica si radiologica de tuberculoza activa;

-contactii pacientilor cu forme contagioase de TBC;

-screening-ul persoanelor cu risc crescut: personalul din unitati sanitare si institutii de ingrijire, persoane provenite din medii cu igiena deficitara, etc^1;4;5.

Un studiu din 2008 a indicat faptul ca testul poate fi aplicat si copiilor peste 2 ani in scopul diagnosticarii tuberculozei latente, cu aceleasi caracteristici de performanta ca si la adulti².

Mentiune: QuantiFERON TBC inlocuieste testul la tuberculina; nu trebuie folosite concomitent ambele teste^1;4;5.

2. Poate constitui un instrument pentru monitorizarea pacientilor cu tuberculoza activa. Exista unele studii care indica potentiala utilitate a testului in evaluarea eficientei tratamentului tuberculostatic prin urmarirea cantitatii de interferon gamma eliberate care se modifica in timp⁶.

Conform unui studiu, evaluarea prin QuantiFERON la 2 luni de la initierea terapiei poate avea valoare predictiva semnificativa asupra probabilitatii ca la sfarsitul fazei intensive de tratament culturile din sputa sa ramana pozitive³.

3. Poate fi folosit inaintea unei terapii imunosupresoare (de ex. cu anticorpi anti-TNFα) sau inaintea transplantului de organe pentru a exclude o infectie latenta cu M. tuberculosis^1;4.

Pregatire pacient – se va intrerupe terapia imunosupresoare (citostatice) cu cel putin 14 zile inaintea recoltarii⁴.

Specimen recoltat – sange venos⁴.

Recipient de recoltare – vacutainer cu heparinat de litiu⁴.

Volum proba – minim 10 mL sange heparinat⁴.

Stabilitate proba – sangele trebuie sa ajunga in 12 ore (max.16 ore) la laboratorul la care se efectueaza testul si in aceasta perioada se pastreaza la temperatura camerei. Este contraindicata refrigerarea probei⁴.

Cauze de respingere a probei – specimene care au depasit intervalul de stabilitate, probe refrigerate sau congelate⁴.

Metoda

Sangele heparinat al pacientului se incubeaza timp de 24 ore impreuna cu un amestec de peptide sintetice ce simuleaza cele 3 proteine specifice pentru M. tuberculosis : ESAT- 6, CFP- 10 si TB 7.7 (p4). Aceste proteine sunt produse de toate tulpinile de Mycobacterium tuberculosis si de tulpinile patogene de Mycobacterium bovis, dar nu si de catre tulpinile incluse in vaccinul BCG . Astfel, QuantiFERON este mai specific decat testul la tuberculina in detectarea infectiei cu M. tuberculosis. Daca in proba de sange sunt limfocite T cu memorie pentru aceste proteine (ceea ce se intampla si in cazul unei infectii cu multi ani in urma), aceste celule vor produce γ-interferon in contact cu antigenul specific. Determinarea cantitativa a γ-interferonului eliberat in plasma se face printr-o metoda imunoenzimatica inalt sensibila (ELISA). Se utilizeaza obligatoriu controale pozitive si negative pentru a asigura validitatea testului. Controlul pozitiv este reprezentat de fitohemaglutinina (substanta mitogena) iar controlul negativ de ser fiziologic (folosit ca un blank pentru a masura nivelul bazal de γ-interferon). Cantitatea de γ-interferon eliberata este exprimata in UI/mL^1;4.

Interpretarea rezultatelor

Rezultat negativ (cantitatea de γ-interferon eliberata < 0.35 UI/mL)

In conditiile date se poate exclude o infectie cu Mycobacterium tuberculosis. Totusi, la pacientii cu infectie cronica HIV sau alte cauze care dau o imunodeficienta severa (tratament imunosupresor, anumite afectiuni hematologice: leucemii, limfoame, anumite tumori solide: pulmonare sau din regiunea cap-gat, diabet, silicoza, insuficienta renala cronica) trebuie luat in considerare statusul imun actual si utilizate si alte metode de diagnostic a infectiei^1;4.

Un studiu recent efectuat in Japonia indica faptul ca QuantiFERON TB test este mai util in diagnosticarea infectiei tuberculoase la pacienti imunodeprimati decat testul la tuberculina. Totusi, avand in vedere faptul ca  s-a obtinut o rata crescuta de rezultate neconcludente la pacientii cu limfopenie care primesc tratament imunosupresor rezultatele trebuie interpretate cu prudenta la aceasta categorie de pacienti⁷.

In cazul unui rezultat negativ la persoanele care au venit recent in contact cu pacienti diagnosticati cu forme de TBC contagios acesta va fi confirmat printr-un nou test efectuat la 6-8 saptamani de la sfarsitul perioadei de expunere (ca si in cazul testului la tuberculina) ^1;4.

Rezultat pozitiv (cantitatea de γ-interferon eliberata ≥ 0.35 UI/mL)

Un rezultat pozitiv indica o infectie cu M. tuberculosis. In majoritatea cazurilor, diferentierea dintre o infectie latenta si una activa nu este posibila cu acest test.

In cazul suspiciunii clinice de tuberculoza activa raman valabile toate metodele de diagnostic microbiologic (microscopie, cultura) si de biologie moleculara^1;4.

Rezultat neconcludent

Apare in situatia in care nu s-au obtinut criteriile de validare fie a controlului pozitiv mitogen (raspuns inadecvat < 0.5 UI/mL), fie ale controlului negativ (nivel bazal crescut al γ-interferonului). In conditiile in care recoltarea si transportul probei s-au efectuat in conditii adecvate, lipsa de validare a controlului mitogen indica cel mai probabil o imunosupresie severa cauzata de SIDA si tratamentul curent cu medicamente imunosupresoare (corticosteroizi in doze mari, antagonisti ai TNFα, medicamente folosite la pacientii cu transplant de organe) ^1;4.

Limite

Valoarea predictiva a testului depinde de prevalenta infectiei cu M. tuberculosis in populatia testata. Fiecare rezultat trebuie interpretat in contextul clinic si epidemiologic al pacientului¹.

Bibliografie

1. Gerald H. Mazurek, MD, John Jereb, MD, Phillip LoBue, MD, Michael F. Iademarco, MD, Beverly Metchock, PhD, Andrew Vernon, MD. Guidelines for Using the Test for Detecting Mycobacterium tuberculosis Infection, United States. Division of Tuberculosis Elimination, National Center for HIV, STD, and TB Prevention. MMWR 2005; 54 (No. RR-15).
2. Jennifer Lighter, MD, Mona Rigaud, MD, MPH, Roger Eduardo, BS, Chia-Hui Peng, MPH and Henry Pollack, MD. Latent Tuberculosis Diagnosis in Children by Using the QuantiFERON-TB Gold In-Tube Test. In Pediatrics Vol. 123 No. 1 January 2009, pp. 30-37.
3. Katiyar, S.K.; Sampath, A.; Bihari, S.; Mamtani, M.; Kulkarni, H. Use of the QuantiFERON-TB Gold In-Tube® test to monitor treatment efficacy in active pulmonary tuberculosis. In The International Journal of Tuberculosis and Lung Disease, Volume 12, Number 10, October 2008 , pp. 1146-1152(7).
4. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.
5. Laboratory Corporation of America.Directory of Services and Interpretive Guide. QuantiFERON®-TB Gold www.labcorp.com 2010. Ref Type: Internet Communication
6. R. Markova, R. Drenska, Y. Todorova, V. Terzieva and D. Stefanova. Monitoring the efficacy of anti-TB therapy by using the QuantiFERON-TB Gold In tube test. In European Respiratory Review, 2008;17: 74-75.
7. Y. Kobashi, K. Mouri, Y. Obase, M. Fukuda, N. Miyashita and M. Oka. Clinical evaluation of QuantiFERON TB-2G test for immunocompromised patients. Division of Respiratory Diseases, Dept of Medicine, Kawasaki Medical School, Kurashiki, Japan, 2008.