Anticorpi anti-gangliozide IgG/IgM

Laborator Synevo

Informatii generale

Gangliozidele sunt componente  glicolipidice prezente in membrana externa a celulelor nervoase periferice. Gangliozidele apartin grupului de glicolipide acide care contin lipide (ceramide), oligozaharide si acid sialic.

Structuri asemanatoare gangliozidelor apar de asemenea pe suprafata unor microorganisme. Neuropatiile inflamatorii apar cel mai adesea in urma infectiilor cu Campylobacter jejuni, cu Citomegalovirus, cu virusul Epstein-Barr, cu Mycoplasma pneumoniae sau Haemophilus influenzae. Anticorpii indreptati impotriva gangliozidelor aflate in structura microorganismelor pot determina reactii incrucisate cu gangliozidele din structura mielinei si a fibrelor nervoase inducand procese inflamatorii cu demielinizari consecutive. Ca rezultat al acestei reactii incrucisate cu structurile microbiene, anticorpii anti GM₁ de tip IgM pot fi intalniti si la persoane sanatoase (o singura determinare cu valoare crescuta nu este patognomonica pentru neuropatie)² .

Neuropatii motorii periferice pot sa apara la pacienti cu gamapatie monoclonala IgM, a caror paraproteine IgM reactioneaza cu gangliozidele GM₁ si GD_1b . Desi anticorpii anti GM₁ si GD_1b pot fi implicati intr-o varietate de sindroame neurologice, prezenta lor in titruri crescute este mai caracteristica afectiunilor neuronale motorii decat altor tipuri de afectiuni neuronale⁴.

Recomandari pentru determinarea anticorpilor anti-gangliozide –  evaluarea pacientilor cu diverse neuropatii motorii si senzoriale³.

Pregatire pacient –nu necesita o pregatire deosebita^1,2.

Specimen recoltat – sange venos^1,2,3

Recipient de recoltare – vacutainer fara anticoagulant, cu/fara gel separator^1,2.

Prelucrare necesara dupa recoltare – se separa serul prin centrifugare si se poate pastra pana la 3 zile la 2 – 8°C.

Volum proba – minim 2 mL ser¹.

Cauze de respingere a probei

• specimen hemolizat¹;
• specimen expus la temperatura ridicata¹;
• specimen contaminat bacterian¹.

Stabilitate proba –serul separat este stabil 3 zile 2-8°C; pe termen lung la -20°C^1,2. Nu decongelati/recongelati^1,2.

Metoda – Test imunodot pentru determinarea calitativa a anticorpilor IgG si/sau IgM fata de gangliozide (test screening – nu diferenţiază anticorpii IgG de cei IgM); stripurile sunt alcatuite dintr-o membrana pe care sunt trasate 13 linii diferite corespunzatoare diverselor autoantigene – o linie serveste drept control pozitiv iar celelalte 12  contin urmatoarele gangliozide inalt purificate: GM1, GM2, GM3, GM4, GD1a, GD1b, GD2, GD3, GT1a, GT1b, GQ1b si sulfatide. In cursul primei etape de incubare autoanticorpii din proba pacientului se leaga de antigenele tinta imobilizate la nivelul membranei (faza solida). Dupa o etapa de spalare, strip-ul este incubat cu 2 solutii de conjugat (anti-IgG si respectiv anti-IgM uman) marcat cu peroxidaza. Conjugatul se va atasa la portiunea IgG si/sau IgM a complexului antigen-anticorp. Dupa indepartarea prin spalare a conjugatului nelegat se adauga substratul – tetrametilbenzidina. Daca este prezent conjugatul legat, peroxidaza va transforma solutia incolora a substratului intr-o linie de precipitare corespunzatoare autoantigenului tinta de pe strip. Dupa o etapa de uscare, vor fi vizualizate si interpretate benzile obtinute.

Valori de referinta – anticorpi anti-gangliozide: GM1, GM2, GM3, GM4, GD1a, GD1b, GD2, GD3, GT1a, GT1b, GQ1b si sulfatide.  – negativ.

Interpretarea rezultatelor

Urmatorii anticorpi antigangliozide au fost descrisi ca fiind specifici pentru diferite neuropatii ale sistemului nervos periferic²:

Sindrom Guillain-Barre	GM1,GD1a ,GD1b , GT1a, GT1b , GQ1b	Ig G (IgM)
Sindrom Miller-Fisher	GQ1b , GT1a	IgG
Neuropatie motorie multifocala	GM1, GM2 ,GM3 , GD1a , GD1b	IgM
Polineuropatie inflamatorie demielinizantacronica	GM2 , GM3 ,GD1a ,GD1b	IgM
Neuropatie ataxica cronica	GM3 ,GD1b ,GD2 , GD3 , GT1b , GQ1b	IgM
Neuropatie senzoriala ataxica acuta	GD1b , GD3	IgG
Neuropatie axonalamotorie acuta	GM1 , GD1a	IgG
Neuropatie demielinizantain paraproteinemia IgM	sulfatide	IgM (IgG)

Limite si interferente

In mod normal determinarea ar trebui sa fie negativa la indivizii sanatosi. Totusi anticorpi anti-GM₁ tip IgM pot fi pozitivi la persoane sanatoase datorita reactivitatii incrucisate cu antigenele microbiene. De aceea diagnosticul clinic nu se va baza doar pe aceasta determinare ci va lua in considerare coroborarea tuturor datelor clinice si paraclinice². 

Bibliografie

1. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.
2. IMD Berlin- Test Catalog Anti-Gangliosid Dot -Instruction Manual.
3. www.mayomedicallaboratories.com  Test Catalog: Acetylcholine Receptor Antibodies. Ref Type: Internet Communication.
4. Richard A. McPetersen, Matthew R. Pincus Organ-Specific Autoimune Diseases.In Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods- Sauders Elsevier 21-Ed 2007- pg 958.