Inhibitorul activatorului plasminogenului PAI-Antigen

Analize medicale

Laborator Synevo

 

Informatii generale

PAI-1 este inhibitorul fiziologic primar al activarii plasminogenului in sange, tintind t-PA (activatorul tisular al plasminogenului) si u-PA (urokinaza), jucand astfel un rol important in reglarea fibrinolizei. In afara functiei proteolitice acesta pare a avea un rol in remodelarea tisulara prin interferarea cu procesele de adeziune si migrare celulara dependente de vitronectina1.

Situsurile potentiale de sinteza constitutiva a PAI-1 includ ficatul, splina, tesutul adipos, celulele endoteliale, macrofagele, megakariocitele1. Eliberarea PAI-1 este stimulata de citokine, factori de crestere si lipoproteine in cadrul raspunsului inflamator global3. Fractiunea majora a PAI-1 in sange este prezenta in α-granulele plachetare, aparent sintetizata in megakariocite. Timpul de injumatatire al PAI-1 in sange este <10 minute, acesta circuland in asociere noncovalenta cu vitronectina, o componenta a plasmei si matrixului pericelular1;3.

PAI-1 este o glicoproteina formata dintr-un singur lant polipeptidic de 379 aminoacizi, din care lipsesc complet reziduurile de cisteina, cu o GM relativa de 50kD si 13% continut carbohidrat. Este o serpina inhibitorie cu un situs reactiv format dintr-o legatura Arg-Met; interactiunea cu t-PA sau u-PA duce la formarea rapida a unui complex reversibil, iar clivarea situsului reactiv de catre proteaza determina o ampla modificare conformationala a inhibitorului si proteazei, cu inactivarea ambelor. PAI-1 se converteste spontan intr-o forma inactiva (latenta), in care situsul reactiv este inaccesibil proteazelor. O forma mutanta de PAI-1 eate stabilizata in conformatia activa ca urmare a unor substitutii in 4 situsuri ale genei PAI-11. Toate formele circulante de PAI-1 (activa, latenta, complexata cu t-PA sau u-PA) sunt detectate ca antigen PAI-16.

Atat PAI-1 cat si t-PA se caracterizeaza prin rate de turnover crescute, cu PAI-1 functional mentinut la concentratii molare de cateva ori in exces fata de concentratiile t-PA functional. De asemenea 80% din antigenul t-PA din plasma este gasit complexat cu PAI-1, timpul de injumatatire al complexelor fiind de ~5 minute. Spre deosebire de t-PA, PAI-1 formeaza complexe numai cu varianta formata din 2 lanturi a urokinazei (tcu-PA),  si nu complexeaza cu forma cu un singur lant a acesteia (scu-PA). Conversia scu-PA in tcu-PA are loc la nivelul lizei cheagului de fibrina. Urokinaza este implicata in procese fiziologice si patologice implicand dezvoltarea embrionara, vindecarea ranilor, migrarea celulara, inflamatie, metastazarea celulelor tumorale. Studiile in vitro sugereaza rolul reglator al PAI-1 ca inhibitor al evenimentelor mediate de u-PA in afara vaselor.

Deficienta congenitala de PAI-1 este rara, cu indivizii homozigoti manifestand sangerare excesiva ca raspuns la traumatisme, fara alte anomalii de dezvoltare sau de alta natura1.

La populatia normala concentratia plasmatica de PAI-1 variaza intr-un range de peste 15 ori (6-80 ng/mL) si prezinta variatii circadiene, cu nivelul de varf dimineata si niveluri scazute seara. Aceasta variabilitate se datoreaza pe de o parte polimorfismului genei PAI-1, iar pe de alta parte responsivitatii expresiei genei PAI-1 la o varietate larga de conditii fiziologice si agenti farmacologici1. Niveluri crescute de PAI-1 au fost raportate in boli maligne, hepatice, postchirurgical, soc septic, trimestrele II si III de sarcina, obezitate, rezistenta la insulina, diabet, hipertensiune, boala coronariana5;6. Tratamentul hipertensiunii arteriale cu inhibitori ai enzimei de conversie sau antagonisti ai receptorului angiotensinei II, tratamentul cu gemfibrozil, consumul modest de alcool si tratamentul hormonal substitutiv postmenopauza scad productia PAI-12.

Nivelurile crescute de PAI-1 au fost asociate cu tromboza venoasa si arteriala. Un studiu european a demonstrat o incidenta crescuta a evenimentelor vasculare asociate cu niveluri bazale mai mari ale antigenului PAI-1. Teoretic niveluri marcat crescute ale PAI-1 ar putea afecta incercarile de tromboliza farmacologica la pacientii cu tromboza arteriala si venoasa. Niveluri crescute de PAI-1 au fost gasite la 59% din pacientii tineri cu trombembolism arterial neexplicat. Acelasi defect a fost descoperit la pacientii cu tromboza venoasa recurenta. La pacientii cu interventii chirurgicale majore s-au decelat niveluri crescute de PAI-1 ca parte a raspunsului de faza acuta2. Nivelurile crescute de PAI-1 par a fi un factor de risc independent pentru reocluzia vasculara la supravietuitorii tineri dupa infarctul miocardic.  De asemenea acestea au fost asociate cu tromboza venoasa profunda dupa chirurgia de inlocuire a soldului si la indivizii cu rezistenta la insulina. Pe de alta parte, PAI-1 fiind un reactant de faza acuta ar putea sa nu fie direct responsabil de tendinta protrombotica observata3. Antigenul PAI-1 a fost identificat ca un marker independent pentru aparitia bolii veno-ocluzive dupa transplantul medular si poate distinge boala veno-ocluziva de alte cauze de hiperbilirubinemie post-transplant medular, cum ar fi boala grefa contra gazda sau toxicitatea medicamentoasa. In plus antigenul PAI-1 si bilirubina sunt variabile independente pentru predictia bolii veno-ocluzive severe5.

Recomandari pentru efectuarea testului – identificarea deficitului/nivelului crescut ereditar de PAI-1; determinarea riscului de boala veno-ocluziva asociata cu transplantul medular; marker prognostic pentru aparitia/reaparitia trombozei; evaluarea fibrinolizei (in combinatie cu alte componente ale sistemului fibrinolitic: fibrinogen, plasminogen, D-dimeri).5

Pregatire pacient – pacientul trebuie sa fie linistit si colectarea se face dimineata pentru evitarea variatiilor diurne ale rezultatelor4.

Specimen recoltat – sange venos4.

Recipient de recoltare – vacutainer cu citrat de Na 0.105M (raport citrat de sodiu – sange=1/9). Presiunea realizata de garou trebuie sa fie intre valoarea presiunii sistolice si cea a presiunii diastolice si nu trebuie sa depaseasca 1 minut. Daca punctia venoasa a esuat, o noua tentativa pe aceeasi vena nu se poate face decat dupa 10 minute4.

Cantitate recoltata – cat permite vacuumul; pentru a preveni coagularea partiala a probei se va asigura amestecul corect al sangelui cu anticoagulantul, prin miscari de inversiune a tubului4.

Prelucrare necesara dupa recoltare – centrifugare 15 min. la 2500 g pentru obtinerea plasmei(plasma trebuie sa fie foarte saraca in trombocite, T <10000/μL – dubla centrifugare), urmata imediat de separarea plasmei si congelarea acesteia; probele recoltate in afara laboratorului vor fi transportate in recipientul destinat probelor congelate4.

Cauze de respingere a probei – vacutainer care nu este plin; proba de singe hemolizata sau coagulata; plasma care nu a ajuns congelata la laborator4.

Stabilitate proba – plasma separata este stabila 4 saptamani la – 20ºC4. 

Metoda – test imunoenzimatic (EIA) 4.

Valori de referinta – 4-43 ng/mL4.

Limite si intreferente

Colectarea si procesarea incorecta a probei poate duce la eliberarea si activarea PAI-1 din trombocite5,6.

Prezenta anticorpilor monoclonali proveniti de la soarece poate duce la obtinerea de rezultate eronate5.

Bibliografie

  1. Brummel-Ziedins K, Orfeo T, et al. “Blood Coagulation and Fibrinolysis”. In Wintrobe`s Clinical Hematology, Greer J, Foerster J, Lukens J, Rodgers G, Pareskevas F, Glader B, 11th ed, Lippincott Williams & Wilkins, 2004, 582-3.
  2. Deitcher S, Rodgers G. „Thrombosis and Antithrombotic Therapy”. In Wintrobe`s Clinical Hematology, Greer J, Foerster J, Lukens J, Rodgers G, Pareskevas F, Glader B, 11th ed, Lippincott Williams & Wilkins, 2004, 1476.
  3. Hajjar K, Francis C. „Fibrinolysis and Thrombolysis”. In Williams Hematology, Lichtman M, Beutler E, Kipps T, Seligsohn U, Kaushansky K, Prchal J., 7th ed, McGraw-Hill Medical, 2006, 2094, 2097-98.
  4. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate, 2010. Ref Type: Catalog.
  5. Laboratory Corporation of America. Directory of Services and Interpretive Guide. Plasminogen Activator Inhibitor (PAI) Antigen. www.labcorp.com. 2010. Ref Type: Internet Communication.
  6. Mayo Clinic, Mayo Medical Laboratories. Reference Laboratory Services for Health Care Organizations. Plasminogen Activator Inhibitor, Plasma. www.mayomedicallaboratories.com. 2010. Ref Type: Internet Communication.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *