Concentrat leucocitar

Laborator Synevo

 

Informatii generale

Detectia unor elemente patologice posibil prezente in sangele periferic poate fi marita prin prepararea unei fractiuni concentrate a elementelor nucleate sanguine (“buffy coat”). Cand este prezent doar un numar mic de celule imature sau elemente celulare anormale, acestea pot sa nu fie detectate pe frotiul de sange obisnuit, concentratul leucocitar putand fi de ajutor in identificarea lor.

Recomandari pentru determinarea concentratului leucocitar 

-pancitopenia fara o cauza aparenta: detectia de celule imature sau anormale;

-leucemia leucopenica: detectia de blasti;

-tablou leucoeritroblastic: identificarea de precursori mieloizi, eritroblasti, fragmente de megakariocite.

-anemie macrocitara (megaloblastica): identificarea de megaloblasti (precursori eritroizi nucleati) si granulocite hipersegmentate;

-mielom multiplu: prezenta de plasmocite.

-hairy cell leukemia: identificarea de celule paroase.

-atunci cand se suspecteaza prezenta de celule tumorale circulante (limfoame in faza leucemica).

-prezenta de paraziti sau bacterii intraleucocitare³.

Pregatire pacient – à jeun/postprandial².

Specimen recoltat – sange venos².

Recipient de recoltare – vacutainer cu K₃-EDTA².

Cantitate recoltata – 2 tuburi (cat permite vacuumul)².

Cauze de respingere a probei – tub incorect, specimen coagulat/hemolizat².

Prelucrare necesara dupa recoltare – se aseaza tuburile intr-un stativ in pozitie verticala si se lasa la temperatura camerei 2-3 ore, timp in care elemente celulare sanguine sedimenteaza separandu-se de plasma. Se aduna cu o pipeta plasma supernatanta impreuna cu stratul leuco-trombocitar situat deasupra stratului eritrocitar si o mica portiune din stratul eritrocitar. Se trece plasma colectata intr-o eprubeta si se centrifugheaza 10 minute la 2000 rpm, leucocitele si trombocitele depunandu-se pe fundul eprubetei. Se indeparteaza plasma supernatanta cu exceptia unei mici cantitati care va servi ca diluant al sedimentului din care se vor intinde frotiurile ce vor fi colorate May-Grunwald-Giemsa².

Stabilitate proba – frotiurile trebuie efectuate cat mai repede dupa recoltare (primele 2-3 ore); frotiurile fixate in metanol sunt stabile necolorate cel putin 1 an fara scaderea calitatii².

Metoda de determinare – examinare microscopica initial la putere mica (obiectivul de 20x), apoi cu obiectivul de 100x cu imersie. Se examineaza cu atentie marginile si franjurii frotiului unde se dispun adesea precursorii mieloizi (mielocite, promielocite, blasti) si eritroblastii^1;2;3.

Valori de referinta – absente elemente celulare anormale².

Semnificatie clinica – pe lamele de concentrat leucocitar pot fi prezente celule sanguine care nu apar in mod obisnuit in formula leucocitara curenta, cum ar fi: mielocite, metamielocite^1;2.Pe lamele de concentrat leucocitar nu se pot aprecia cu acuratete morfologia eritrocitara, numarul de trombocite si formula leucocitara. Uneori se poate observa un numar mai mare de monocite. Totusi frotiurile de concentrat leucocitar bine efectuate sunt reprezentative pentru populatia generala de celule nucleate prezenta in sange. In cazurile cu leucopenie se pot examina intr-un timp scurt mult mai multe celule decat pe frotiul obisnuit. Identificarea de celule imature, celule anormale, blasti, celule tumorale circulante sau alte forme nucleate circulante, precum si bacterii sau paraziti intraleucocitari (organisme neobisnuite, cum ar fi infectii severe cu Strongyloides stercoralis la pacienti imunodeprimati, microfilarii)  furnizeaza informatii diagnostice importante si poate reduce necesitatea altor teste mai complexe¹.

Limite si interferente – prepararea frotiurilor de concentrat leucocitar poate determina distorsiuni celulare, in special ale celulelor fragile (vezi si limite si interferente ale frotiului de sange)¹.

Bibliografie

1. DeMott W, Tilzer L, Hematology. In Laboratory Test Handbook, 3rd Edition, Hudson (Cleveland), 1994, 526-527.
2. Metode curente pentru analize de laborator clinic, Ministerul Sanatatii, Academia de Stiinte Medicale, Editura Medicala, 1982: 46-47.
3. Shafer J, Canadian Society of Laboratory Technologist Congress, Winnipeg, Manitoba, June 16 to 20, 1996, Workshop Manual, p159-161.