Borrelia burgdorferi ADN in sange,LCR,lichid articular,biopsie cutanata

Laborator Synevo

 

Informatii generale

Boala Lyme este o afectiune multisistemica aparuta dupa muscatura de capusa infectata cu Borrelia burgdorferi. Studiul diferentelor antigenice dintre tulpinile izolate in America si Europa a permis recunoasterea implicarii in patologia umana a trei genospecii care alcatuiesc complexul Borrelia burgdorferi sensu lato: Borrelia burgdorferi sensu stricto (ce cuprinde toate tulpinile izolate in America de Nord), B. garinii si B. afzelii. In Europa circula toate cele trei genospecii, dar predomina B. garinii si B. afzelii^1;2;3;6;7

Tehnicile moleculare reprezinta o alternativa in diagnosticul bolii Lyme  si se bazeaza pe amplificarea unei regiuni specifice a genomului bacterian. Acestea au aplicabilitate pentru toate  produsele  patologice recoltate in diferite stadii ale infectiei, dar se recomanda a fi utilizate doar la pacientii care au un rezultat pozitiv sau echivoc la testele serologice⁶.

Recomandari pentru determinarea Borrelia – ADN – diagnosticul bolii Lyme; astfel¹:

Stadiul I – biopsie cutanata din eritemul migrator;

Stadiul II – biopsie cutanata din eritemul migrator diseminat sau LCR in caz de neuroborelioza;

Stadiul III – biopsie cutanata in acromodermatita cronica atrofica, lichid sinovial in artrita Lyme sau LCR in neuroborelioza.

Tehnica PCR are  o sensibilitate mai mare decat cultura in cazul prelevatelor bioptice, a sangelui si a lichidului articular, spre deosebire de LCR si urina unde rezultatele  nu au fost satisfacatoare ^1;7.

Studii efectuate prin analiza PCR a lichidului articular provenit de la pacienti cu artrita Lyme au demonstrat o sensibilitate si specificitate excelenta (Nocton, 1994; Dumler, 2001). Spre deosebire de acestea, studiile efectuate pe LCR provenit de la pacienti cu neuroborelioza acuta sau cronica au demonstrat o imbunatatire minima a sensibilitatii, in comparatie cu cultura.

In tabelul de mai jos este prezentata sensibilitatea metodei PCR – ADN Borrelia,  in functie de produsul patologic examinat si de stadiul infectiei⁶:

PRODUS   PATOLOGIC	SENSIBILITATE %
Biopsie cutanata (EM si ACA)	50-70
LCR	Stadiul  I      60 Stadiul  II     30
Biopsie  articulara	50-70
Sange	< 10

Exista laboratoare care folosesc aceasta tehnica pentru a extrage materialul  genetic al Borreliei direct din capusa care a determinat muscatura, precizand daca aceasta a fost infectata sau nu⁴.

Pregatire pacient – nu este necesara⁴.

Specimen recoltat – a) biopsie cutanata; b) lichid cefalorahidian recoltat prin punctie lombara; c) lichid sinovial; d) sange venos; e) urina; f) capusa extrasa de la locul intepaturii⁴.

Recipient de recoltare – vacutainer ce contine EDTA ca anticoagulant pentru proba de sange venos si recipient steril pentru celelalte produse biologice⁴.

Cantitate recoltata – a) fragment de piele; b) 2 mL; c) 2 mL; d) 3 mL; e) 10 mL⁴.

Prelucrare necesara dupa recoltare – probele nu vor fi centrifugate⁴.

Cauze de respingere a probei – cantitate insuficienta; probe vechi, coagulate, hemolizate; folosirea heparinei ca anticoagulant⁴.

Stabilitate proba – probele de sange, produs din leziune, LCR, urina, lichid articular sunt stabile 48 ore la 2-4°C inainte de extractia acizilor nucleici⁴.

Metoda – Real-time PCR Light-Cycler: reactie de polimerizare in lant cu detectie in timp real a produsului PCR  acumulat, prin masurarea fluorescentei emise (test calitativ)⁴.

Valori de referinta

Borrelia – ADN: nedetectabil⁴.

Limita de detectie – 276 copii/ mL⁴.

Interpretarea rezultatelor

Un rezultat pozitiv indica prezenta de ADN Borrelia in proba recoltata⁶.

Limite si interferente

Un rezultat negativ nu exclude infectia cu Borrelia, in timp ce un rezultat pozitiv in afara contextului clinic, nu confirma diagnosticul ^3;6;7.

Testul PCR trebuie folosit ca o metoda care imbogateste paleta de investigatii in boala Lyme si nu poate inlocui celelalte metode. Rezultatele obtinute vor fi corelate obligatoriu cu serologia, datele clinice si epidemiologice ale pacientilor⁶.

Bibliografie

1. Bettina Wilske, Barbara J. B. Johnson, and Martin E. Schriefer. Borrelia In:Patrick R. Murray et al. – “Manual of Clinical Microbiology, 9th ed. , 2007 , 62: 971- 986.
2. Betty A. Forbes, Daniel S. Sahm, Alice S. Weissfeld. The Spirochetes.In Diagnostic Microbiology, Twelfth Edition, 2007, 48: 533–541.
3. Koneman’s, Spirochetal infections. In Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, Sixth Edition, 2006, 20: 1125-1150.
4. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.
5. Mayo Clinic. Mayo Medical Laboratories. Test Catalog: Lyme Disease (Borrelia burgdorferi), Molecular Detection, PCR. www.mayomedicallaboratories.com. Ref Type: Internet Communication.
6. Volker von Baehr, Christa Liebenthal, Brita Gaida, Frank- Peter Schmidt, Rudiger von Baehr und Hans-Dieter Volk. Evaluation of the diagnostic significance of the lymphocyte proliferation test in patients with Lyme borreliosis. In J Lab Med, 2007; 31(3).
7. P. Rocco La Sala, Michael B. Smith. Spirochete Infections. In Henry’s Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, Twenty-First Edition, 2007, 58, 1059- 1074.