Triptaza

Informatii generale

Triptaza, o proteaza neutra, constituie principala componenta proteica din granulele secretorii ale mastocitelor. Astfel, mastocitele raspandite in tesutul conjunctiv de la nivelul tegumentului, tractului respirator si digestiv stocheaza 10-35 pg de triptaza/celula.

Din punct de vedere structural, triptaza este o serin esteraza cu greutatea moleculara 134 kDa, alcatuita din 4 subunitati, fiecare detinand un situs enzimatic activ propriu. Acest tetramer este legat de proteoglicani: heparina sau condroitin sulfati; complexele sunt eliberate in cursul degranularii mastocitare. Dupa disocierea de heparina triptaza se degradeaza spontan in subunitatile monomerice inactive enzimatic^4;6.

Spre deosebire de mastocitele cutanate si pulmonare, bazofilele umane contin de 300-700 ori mai putina triptaza. Din acest motiv se crede ca activarea mastocitelor printr-o reactie de hipersensibilitate IgE-mediata reprezinta principala sursa de triptaza detectata in ser.

Triptaza este eliberata din mastocitele activate in paralel cu histamina stocata si alti mediatori vasoactivi nou generati⁶.

Sunt descrise doua forme de triptaza – α si β – codificate de gene diferite. α – triptaza din sange este esentialmente secretata de catre toate mastocitele si este astfel considerata o reflectare a numarului total de mastocite. Nivelele serice de β-triptaza matura se coreleaza cu magnitudinea activarii mastocitare. Astfel, valori crescute de α – triptaza se inregistreaza in special in mastocitoza sistemica, in timp ce cresteri ale β-triptazei predomina in anafilaxie^3;6.

Anafilaxia este o reactie acuta, potential letala care afecteaza organe multiple. Anafilaxia alergica include reactii IgE-mediate (de exemplu, induse de alimente, medicamente sau veninuri de insecte) si altele care nu sunt IgE mediate, cum ar reactiile citotoxice la transfuzii. Evenimentele anafilactice non-alergice se pot datora eliberarii directe a mediatorilor din mastocite si bazofile (reactii induse de opiacee, factori fizici), activarii sistemului de contact (reactii produse in cursul dializei), tulburarilor in metabolismul acidului arahidonic (reactii induse de aspirina sau alte antiinflamatorii nonsteroidiene) sau recrutarii de multimediatori (complement, sistemul cogularii si fibrinolizei, sistemul de contact)⁵. Tabloul clinic este dominat de manifestarile respiratorii (dispnee, tahipnee, bronhospasm, edem laringian) si cardiovasculare (tahicardie, hipotensiune, tulburari de ritm, angina, stop cardiac) la care se adauga cele digestive (greata, varsaturi, dureri abdominale, diaree) si cutanate (eritem, prurit generalizat, urticarie, angioedem)¹.

Majoritatea reactiilor anafilactice implica degranularea mastocitelor si bazofilelor cu eliberarea de mediatori. Triptaza eliberata prezinta o activitate de kalicreina, poate activa cascada complementului si cliva fibrinogenul⁵.

  

Nivelurile serice de triptaza ating un varf in decurs de 30-60 minute de la debutul reactiei anafilactice declansata de intepaturi de insecte, medicamente sau alimente. Valorile se mentin crescute 4-6 ore, astfel ca momentul optim de recoltare a probei este in intervalul 30 minute – 3 ore de la evenimentul suspectat ca fiind anafilaxie. Prin comparatie, histamina este indepartata din circulatie in 30-60 minute^1;2;6.

Mastocitoza este o afectiune caracterizata clinic prin prurit, congestie, greata, varsaturi, diaree, dureri abdominale si instabilitate vasculara. Din punct de vedere patogenic, este asociata cu hiperplazie mastocitara la nivelul tegumentului, tractului gastrointestinal, maduvei osoase, splinei, ficatului si ganglionilor limfatici Conform clasificarii OMS actuale, sunt descrise: mastocitoza cutanata, mastocitoza sistemica silentioasa, mastocitoza sistemica asociata cu boli hematologice clonale, mastocitoza sistemica agresiva, leucemia cu mastocite, sarcomul cu mastocite si mastocitomul extracutanat^1;2.

Majoritatea pacientilor cu mastocitoza prezinta o mutatie activatoare la nivelul domeniului de pe gena KIT care codifica receptorul tirozinkinazic pentru factorul celulei stem (SCF). Cea mai obisnuita mutatie are drept consecinta substitutia acidului aspartic cu valina la nivelul codonului 816 (D816V).

Semnele si simptomele clinice ale mastocitozei sistemice se datoreaza eliberarii de mediatori mastocitari, infiltrarii organelor cu mastocite si, la unii pacienti, afectiunii hematologice asociate².

Triptaza serica constituie markerul surogat pentru mastocitoza sistemica cel mai mult utilizat. O valoare a triptazei totale > 20ng/mL este sugestiva pentru mastocitoza sistemica si reprezinta unul dintre criteriile minore de diagnostic a bolii^1;2;6.

Testul utilizat in laboratorul nostru masoara triptaza totala (α +β).

Recomandari pentru determinarea triptazei – confirmarea unei anafilaxii; confirmarea unui test pozitiv de provocare cu alergeni la pacientii cu urticarie; suspiciune clinica de mastocitoza sistemica⁴.

Pregatire pacient – nu este necesara³.

Specimen recoltat – sange venos³.

Recipient de recoltare – vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator³.

Prelucrare necesara dupa recoltare – se separa serul prin centrifugare³.

Volum proba – minim 2 mL ser³.

Stabilitate proba – serul separat este stabil 2 zile la temperatura camerei; 5 zile la 2-4°C si timp indelungat la -20°C³.

Metoda – imunoenzimatica cu detectie fluorimetrica (FEIA). Testul contine 2 anticorpi monoclonali (B12 si G4) care recunosc atat α triptaza cat si β triptaza³.

Valori de referinta – <11.4 μg/L³.

Limita de detectie – 1 μg/L³.

  

Interpretarea rezultatelor

Valorile >11.4 μg/L sunt considerate crescute atat la copii (>4 ani) cat si la adult.

Valorile in dinamica (in conditii bazale si dupa un episod acut) sunt mai semnificative clinic decat determinarile izolate³.

Nivelurile bazale >20 μg/L sunt sugestive pentru mastocitoza sistemica. In mastocitoza sistemica valorile triptazei se coreleaza cu volumul infiltratelor mastocitare. Valori <20 μg/L pot fi detectate la pacienti cu mastocitoza cutanata si la cei cu boala sistemica limitata. In general, cu cat valorile triptazei sunt mai mari cu atat este mai probabila afectarea multiorganica².

Limite si interferente

Obtinerea unei valori normale a triptazei nu exclude un eveniment anafilactic, mai ales daca proba a fost recoltata dupa 12 ore de la episod⁴.

La pacientii cu mastocitoza cutanata valorile triptazei pot sa nu fie crescute².

Bibliografie

1. ARUP Laboratories. Test Directory: Tryptase. www.aruplab.com 2010. Ref Type: Internet Communication.
2. Dean D Metcalfe. Mastocytosis. In Middleton’s Allergy, Seventh Edition., Mosby Elsevier, 2009., 1051-1061.
3. Laborator Synevo. Referintele specifice tehnologiei de lucru utilizate 2010. Ref Type: Catalog.
4. Mayo Clinic/Mayo Medical Laboratories. Test Catalog. Tryptse, Serum. www.mayomedicallaboratories.comRef Type: Internet Communication.
5. Philip L Lieberman. Anaphylaxis. In Middleton’s Allergy, Seventh Edition., Mosby Elsevier, 2009., 1027-1042.
6. Robert G Hamilton. Laboratory Tests for Allergic and Immunodeficiency Diseases: Principles and Interpretations. In Middleton’s Allergy, Seventh Edition., Mosby Elsevier, 2009., 1260.